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浏览量:
产品名称:
E. coli DNA Ligase
NO.
14
货号
CSCE1107
中文名称
E. coli DNA Ligase
英文名称
E. coli DNA Ligase
CAS号
/
产品货号:
CSCE1107
货期:
现货
价格与订购:
600.00
数量
-
+
库存
100
产品信息
如何订购
产品概述icon
E.coli DNA Ligase是以NAD+为辅助因子的酶,可催化双链DNA互补的3'-羟基和5'-磷酸末端之间形成磷酸二酯键,最适用于粘性末端的双
链DNA的连接,但不能有效连接平末端底物。该酶可以热灭活,在一定温度范围内 (4℃ - 37℃) 都有活性。
产品组分icon
组 分 |
CSCE1107 (200 U) |
E.coli DNA Ligase (10 U/μl)a | 20 μl |
10X E. coli DNA Ligase Buffer | 500ul |
a.贮存于10 mM Tris-HCl pH 7.4,50 mM KCl,0.1 mM EDTA,1 mM DTT,200 µg/ml BSA,50% 甘油中。
保存条件icon
-30 ~ -15℃保存,≤0℃运输。
适用范围icon
1. 双链DNA的分子粘性末端克隆。
2. 平末端连接,需要有10%-15%PEG和高浓度的一价阳离子的存在。
3.cDNA第二条链合成产物的cDNA克隆。
单位定义icon
一个单位的DNA连接酶被定义为在标准条件下,16℃ 30分钟内连接hindⅢ消化的λ噬菌体DNA(5'末端的DNA为0.12μM,300μg/ ml的浓度)(> 50%)所需要的酶量。
反应过程icon
将最终浓度为0.12 μM的DNA与适量单位的E.coli DNA ligase在20-50μL1X E. coli DNA Ligase Buffer中16℃孵育过夜。
热灭活条件icon
65℃加热20分钟。
质量控制icon
1.核酸外切酶活性:未检测出污染DNA外切和内切核酸酶,核糖核酸酶活性。
2.活性检测:将20U的E.coli DNA ligase与1μg经HindIII消化过的DNA在50 μL 1X E.coli DNA Ligase Buffer中37℃孵育16小时,在琼脂糖凝胶上形成正常且清晰的条带。
注意事项icon
1. 需要NAD+(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)作为辅助因子,与使用rATP的其他连接酶不同。
2. 平末端片段的连接效率极低。对于平末端片段的连接,使用T4 DNA Ligase。
3. 不能将RNA连接到DNA。
4. 该酶只连接具有粘性末端的DNA片段。
Noteicon
For research use only .
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